Estandarización de PCR en tiempo real para detección y cuantificación de los oncogenes E7 de seis Virus del Papiloma Humano de Alto Riesgo

El cáncer de cuello uterino es causado por la infección persistente del epitelio cervical con los genotipos de alto riesgo del Virus del Papiloma Humano. Para su detección se realizan pruebas moleculares que detectan el gen L1 del VPH. Este gen puede perderse hasta en el 11 % de los casos durante la integración del ADN viral en el genoma del hospedero originando falsos negativos. Por otra parte, el oncogén E7 se expresa durante todas las etapas de progresión de la enfermedad. El objetivo de este trabajo fue estandarizar una PCR en tiempo real del oncogén E7 (E7-qPCR) para genotipificación y cuantificación de 6 VPH-AR. Los resultados muestran que la E7- qPCR amplificó VPH-16, -18, -31, -33, -35 y -45 con una alta sensibilidad con límites de detección desde 102 copias, eficiencias entre 90 y 110 %, valores R2 > 0,97 y análisis de curva de fusión que revelan productos específicos.

Cervical cancer is caused by persistent infection of the cervical epithelium with the high-risk genotypes of the Human Papilloma Virus (HR-HPV). For its detection, molecular tests are carried out that detect the L1 gene of HPV. This gene can be lost in up to 11 % of cases during the integration of viral DNA into the host genome, causing false negatives. On the other hand, the E7 oncogene is expressed during all stages of disease progression. The aim of this work was to standardize a real-time PCR of the E7 oncogene (E7-qPCR) for genotyping and quantification of 6 HR-HPV. The results show that the E7-qPCR amplified HPV-16, -18, -31, -33, -35 and -45 with high sensitivity with detection limits from 102 copies, efficiencies between 90 and 110 %, R2 values >0,97 and melting curve analysis revealing specific products.

Genotipificación del Virus de Papiloma Humano en mujeres de la comuna norte de Bucaramanga / Genotypification of Human Papilloma Virus in women of the comuna Norte de Bucaramanga

Resumen Introducción: La infección persistente con Virus de Papiloma Humano de alto riesgo es causa necesaria para la aparición de cáncer de cérvix. Objetivo: Caracterizar molecularmente los genotipos circulantes de Virus de Papiloma Humano en población de la zona Norte de Bucaramanga. Métodos: Estudio de corte transversal en mujeres de 35 a 65 años con riesgo ≥3 puntos para desarrollar cáncer de cérvix determinado por una encuesta estandarizada. En una muestra cervico-vaginal por autotoma se realizaron pruebas moleculares por tecnología HPV Direct Flow CHIP. Resultados: Se encuestaron 810 mujeres, de éstas 435 (53,7%) se realizaron auto-toma por el riesgo presentado. La mediana de edad fue de 47,3 años (RIQ 41-53 años). Casi la totalidad de la población reside en estrato 1 y 2 (98,8%) y en su mayoría son del régimen subsidiado (87,2%). La prevalencia de infección fue de 10,6% (IC 95%: 7,8 - 13,8), para genotipos de alto riesgo fue de 3,9% (IC 95%: 2,3 - 6,2), de bajo riesgo de 3,5% (IC 95%: 1,4 - 5,6) y para genotipo indeterminado de 1,9%. El genotipo de alto riesgo más común fue VPH-59 y de bajo riesgo fue VPH-62/81. Hubo coinfección con genotipos alto/bajo riesgo en cinco mujeres y coinfección con dos genotipos de bajo riesgo en una mujer. Conclusión: la prevalencia de infección por Virus de Papiloma Humano en mujeres que habitan en zonas vulnerables de Bucaramanga es menor a la reportada en Bogotá y Cali (14,9% y 13%, respectivamente). No se encontró predominio de ningún genotipo de alto riesgo en particular.

Abstract Introduction: Persistent infection with high-risk Human Papilloma Virus is a necessary cause for the appearance of cervical cancer. Objective: Molecularly characterize circulating genotypes of Human Papilloma Virus in population of the north of Bucaramanga. Methods: Cross-sectional study in women aged from 35 to 65 years with risk ≥3 points for develop cervical cancer determined by a standardized survey. In a cervico-vaginal self-sampling probe a molecular test was performed by HPV Direct Flow CHIP technology. Results: 810 women were interviewed, of these 435 (53.7%) performed self-sampling due to the risk calculated. The median age was 47.3 years (RIQ 41-53 years). Almost the entire population resides in poor conditions (stratum1 and 2) (98.8%) and most of them are from the Colombian subsidized social security system (87.2%). The prevalence was 10.6% (CI 95%: 7.8 - 13.8), for high risk genotypes it was 3.9% (CI 95%: 2.3 - 6.2), low risk of 3.5% (CI 95%: 1.4 - 5.6) and for indeterminate genotype of 1.9%. HPV-59 was the most common high-risk genotype and HPV-62/81 was a low-risk genotype. There was coinfection with high risk / low risk genotypes in five women and coinfection with two low risk genotypes in a woman. Conclusion: The prevalence of infection by Human Papilloma Virus in women living in vulnerable areas of Bucaramanga is lower than that reported in Bogotá and Cali (14.9% and 13%, respectively). No predominance of any particular high-risk genotype was found.

Validez y confiabilidad de un instrumento de satisfacción del usuario con síndrome febril agudo / The validity and reliability of an instrument for measuring the satisfaction of users suffering from acute febrile syndrome

Objetivo Determinar la validez y la confiabilidad de un instrumento de satisfacción del paciente con Síndrome Febril Agudo en urgencias y consulta oportuna de la Red Pública de Bucaramanga. Métodos Estudio de evaluación de tecnologías diagnósticas en personas con Síndrome Febril Agudo entre el 2008 y 2009. Se diseñó un cuestionario telefónico a partir de 3 instrumentos en español. Se evaluó validez de contenido mediante sometimiento a expertos y a profesionales de salud y validez facial en una prueba piloto con 30 usuarios. La reproducibilidad fue realizada por dos enfermeras independientemente en 19 encuestas. Resultados Se realizaron 146 encuestas, de estas 75.3 por ciento fueron contestadas por mujeres, 33.6 por ciento por los mismos pacientes y 52.7 por ciento por las madres de estos cuando eran menores de 15 años. Se realizó análisis factorial obteniendo 3 factores: satisfacción con la atención médica, de enfermería y la organización del centro; al modelo final entraron 16 de 26 ítems. El alfa de Cronbach para cada factor fue 0,89 (IC 95 por ciento: 0,86;0,93), 0,78 (IC95 por ciento: 0.67;0.84) y 0,88 (IC95 por ciento: 0.85;0.91) respectivamente; el coeficiente de kappa fue 0.90 (IC95 por ciento: 0.77;0.97) y el coeficiente de correlación intraclase fue 0.955 (IC95 por ciento: 0.862;0.986) El promedio de las diferencias en la sumatoria de los ítems fue -1.3 (DS: 8,5) y los límites de acuerdo de Bland y Altman fueron -18.9 y 15.3. Discusión Este estudio demuestra validez y confiabilidad del instrumento de satisfacción de usuarios de los servicios de urgencias y consulta oportuna y podría aplicarse en la red pública del sistema de salud Colombiano.

Objective Determining the validity and reliability of a user satisfaction instrument applied to patients attending the emergency department and clinic who were suffering from acute febrile syndrome in Bucaramanga's Public Health Network. Methods A diagnostic technology assessment study was conducted between 2008 and 2009 on patients suffering from acute febrile syndrome. A telephone questionnaire was designed using 3 instruments. Content validity was assessed by experts and health professionals and face validity was assessed in a pilot study involving 30 users. Reproducibility was tested in questionnaires independently applied by two nurses to 19 patients. Results Data from 146 surveys was collected; 75.3 percent were answered by women, 33.6 percent were patients and 52.7 percent were their mothers when patients were under 15. Three factors were identified from factor analysis: satisfaction with medical care, nursing and medical centre organisation. The final model included 16 of the 26 items. Cronbach's Alpha for each factor was 0.89 (0.86-0.93 95 percentCI), 0.78 (0.67- 0.84 95 percentCI) and 0.88 (0.85-0.91 95 percentCI), respectively. The Kappa coefficient was 0.90 (0.77-0.97 95 percentCI) and intra-class correlation coefficient was 0.96 (0.86-0.99 95 percentCI). The average difference of the sum of all items was -1.3 (SD: 8.5) and Bland and Altman limits of agreement were -18.9 and 15.3, respectively. Discussion This study established the validity and reliability of a new instrument concerning user satisfaction used with patients suffering from acute febrile syndrome attending emergency health care which that could be applied in the Colombian Public Health System.

Pluviosidad como predictor de consulta por síndrome febril agudo en un área endémica de dengue / Rainfall and acute febrile syndrome in a dengue-endemic area

Objetivo Describir los patrones de consulta por SFA asociado al dengue y evaluar su asociación con la pluviosidad. Métodos En dos clínicas, durante un periodo de 7 meses (de marzo a septiembre) se identificaron 318 casos de SFA indiferenciado que se incluyeron en un seguimiento clínico sistemático. El 31 por ciento (81/281) fueron IgM positivos para dengue. Se evaluó la pluviosidad (litros/metro cuadrado por día) previa como variable explicatoria del patrón de consultas. Resultados Los meses con más casos de SFA fueron junio, julio y septiembre. Los casos de dengue sólo fueron significativamente más frecuentes en julio. Al evaluar los patrones de pluviosidad de las semanas anteriores, la consulta por SFA estuvo asociada con la pluviosidad promedio registrada 5 semanas antes y esta asociación fue independiente de la institución y del mes (Razón de tasas de incidencia ajustada: RTI=1,04; IC95 por ciento 1-1,08; p=0,045). Por otra parte, un promedio de la pluviosidad de 5 semanas consecutivas fue un predictor independiente de consulta por dengue, 4 semanas después (RTI=1,6; IC95 por ciento 1,15-2,22; p=0.006). Se evidenció una relación lineal entre la pluviosidad y las consultas por dengue: pluviosidad (promedio de 5 semanas) x 0,72 (IC95 por ciento 0,60-0,84; p<0,001)=casos por cada 100 000 habitantes en una semana (4 semanas después). Conclusiones La pluviosidad podría predecir el patrón de consulta por dengue en una región endémica.

Objective Describing patterns of acute febrile syndrome (AFS) consultation related to dengue and evaluating association with rainfall. Methods 318 undifferentiated AFS patients were detected in two clinics during a 7-month period (March to September) and then included in systematic clinical follow-up. 31 percent of them (81/281) were IgM positive for dengue. Rainfall (litres/square meter-day) during the previous weeks was evaluated as a variable for predicting consultation patterns. Results June, July and September were the months in which the greatest number of AFS cases occurred. Cases of dengue were only significantly more frequent during July. When evaluating the previous weeks' rainfall patterns, consultation for AFS was seen to be associated with the average rainfall registered 5 weeks beforehand and such association was independent of the institution and/or month (incidence rate ratio IRR=1,04; 1-1.08 95 percentCI, p=0.045). On the other hand, 5 consecutive weeks' average rainfall was an independent predictor of consultation for dengue 4 weeks later on (RTI=1 ,6 ; 1,15-2,22 95 percentCI, p=0.006). A linear relationship was thus proposed (regarding these sentinel clinics) between consultation for dengue and rainfall: lt/mt-day (5 weeks' average rainfall) X 0 ,72 (0,60-0,84 95 percentCI, p<0.001) = cases for each 100 000 habitants per week (4 weeks later). Conclusions: Studying rainfall could predict the pattern of consultation for dengue in endemic regions.